Fiche Baird Parker
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GÉLOSE BAIRD PARKER 1. Contexte d’utilisation Milieu utilisé en microbiologie alimentaire pour l’isolement et la numération des bactéries du genre Staphylococcus. 2. Composition en g/L Base à compléter et à couler ou milieu pré-coulé :
Source de C et de N Facteurs de croissance Accélérateurs de croissance Inhibiteur Gélose Peptones Extrait de viande de bœuf Extrait de levure Pyruvate de sodium Glycine Chlorure de lithium (LiCl) Agar pH 10 5 1 10 12 5 20 = 7,2
5.2. Présence de colonies suspectes
Identifier grâce à la recherche de la protéine A et/ou du récepteur au fibrinogène, de la coagulase libre ou de la thermonucléase en testant : • toutes les colonies suspectes s’il y en a moins de 5, • 5 colonies s’il y en a entre 5 et 25, • la racine carrée du nombre, s’il y en a entre 25 et 100 (arrondir par excès) • recommencer le dénombrement en diluant le produit s’il y en a plus de 100.
N : nombre de colonies suspectes sur Baird-Parker 1!N!5 Colonies testées N 5 ! N ! 25 5 25 ! N ! 100 100 < N Recommencer en diluant
Conclure en calculant la fraction des colonies identifiées comme étant S. aureus.
À ajouter au moment de l’emploi, à raison de 1 mL pour 20 mL de milieu.
Lipolyse et protéolyse Inhibiteurs Gram – Caractère biochimique Émulsion de jaune d’œuf (mL) Tellurite de potassium (g/L) 50 0,1
Le nombre de S. aureus dans le volume étalé est égal au produit de f par le nombre de colonies comptées. Déterminer le nombre de S. aureus dans un gramme ou un mL de produit pur. 6. Causes d’erreur D’autres bactéries peuvent donner des aspects identiques : Micrococcus, Bacillus, levures. EXERCICE D’APPLICATION
Le dénombrement et la recherche de Staphylococcus aureus est effectué dans un steak haché de 115 g. 10 g de steak haché sont dilués dans 90 mL d’eau peptonée, broyés et homogénéisés. La préparation est considérée comme étant une dilution au 1/10ème du steak haché. Une dilution décimale supplémentaire est réalisée. Le dénombrement est réalisé à partir des deux dilutions sur milieu Baird-Parker en surface (2 boîtes par dilution). Le nombre de colonies suspectes est fourni dans le tableau suivant : Dilution 10-1 Dilution 10-2 Première boîte 12 0 Deuxième boîte 8 1
3. Ensemencement Pour une recherche à partir d’un bouillon d’enrichissement (par exemple bouillon de Chapman), on réalise un isolement classique. Pour une numération de Staphylococcus aureus, on étale en surface du milieu 0,1 mL du produit pur ou dilué à l’aide d’une pipette râteau stérile. 4. Lecture On dénombre les colonies de Staphylococcus aureus, ne pas oublier de ramener ce nombre à 1 mL. La présence de tellurite inhibe la plupart des bactéries à Gram négatif. Staphylococcus aureus donnent des colonies brillantes de 0,5 à 2 mm de diamètre : • noires (couleur due à la réduction du tellurite en tellure) tellurite + • éventuellement entourées d’un liseré blanc opaque (dû à la précipitation des acides gras issus de l’action de la lécithinase sur la lécithine du jaune d’œuf) : lécithinase + • entourées d’un halo clair (dû à la protéolyse des protéines du jaune d’œuf) : protéinase + 5. Résultats du dénombrement
5.1. Absence de colonies suspectes
a) Rappeler l’aspect des colonies suspectes d’être S. aureus sur Baird-Parker. b) Indiquer la dilution à partir de laquelle va être poursuivie la recherche. c) Calculer le nombre de colonies suspectes à identifier pour chaque boîte. L’identification est réalisée grâce à la technique d’agglutination sur la lame. d) Donner le nom des molécules mises en évidence à la surface des Staphylococcus aureus. 3 colonies sur la première boîte et 4 colonies sur la deuxième boîte se révèlent être dues à des S. aureus. e) Calculer la fraction de colonies dues à S. aureus par rapport aux colonies testées. f) En déduire le nombre statistique de colonies dues à S. aureus. g) Déterminer le nombre de S. aureus présents dans un gramme de steak haché. h) Conclure. (Critère : 102 Staphylococcus aureus par gramme de viande hachée)
C. LARCHER
Rendre : moins de un Staphylococcus aureus dans 0,1 mL du produit pur ou de la dilution testée.
C. LARCHER
Fiche Baird Parker – Page 1 / 2 –
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Source de C et de N Facteurs de croissance Accélérateurs de croissance Inhibiteur Gélose Peptones Extrait de viande de bœuf Extrait de levure Pyruvate de sodium Glycine Chlorure de lithium (LiCl) Agar pH 10 5 1 10 12 5 20 = 7,2
5.2. Présence de colonies suspectes
Identifier grâce à la recherche de la protéine A et/ou du récepteur au fibrinogène, de la coagulase libre ou de la thermonucléase en testant : • toutes les colonies suspectes s’il y en a moins de 5, • 5 colonies s’il y en a entre 5 et 25, • la racine carrée du nombre, s’il y en a entre 25 et 100 (arrondir par excès) • recommencer le dénombrement en diluant le produit s’il y en a plus de 100.
N : nombre de colonies suspectes sur Baird-Parker 1!N!5 Colonies testées N 5 ! N ! 25 5 25 ! N ! 100 100 < N Recommencer en diluant
Conclure en calculant la fraction des colonies identifiées comme étant S. aureus.
À ajouter au moment de l’emploi, à raison de 1 mL pour 20 mL de milieu.
Lipolyse et protéolyse Inhibiteurs Gram – Caractère biochimique Émulsion de jaune d’œuf (mL) Tellurite de potassium (g/L) 50 0,1
Le nombre de S. aureus dans le volume étalé est égal au produit de f par le nombre de colonies comptées. Déterminer le nombre de S. aureus dans un gramme ou un mL de produit pur. 6. Causes d’erreur D’autres bactéries peuvent donner des aspects identiques : Micrococcus, Bacillus, levures. EXERCICE D’APPLICATION
Le dénombrement et la recherche de Staphylococcus aureus est effectué dans un steak haché de 115 g. 10 g de steak haché sont dilués dans 90 mL d’eau peptonée, broyés et homogénéisés. La préparation est considérée comme étant une dilution au 1/10ème du steak haché. Une dilution décimale supplémentaire est réalisée. Le dénombrement est réalisé à partir des deux dilutions sur milieu Baird-Parker en surface (2 boîtes par dilution). Le nombre de colonies suspectes est fourni dans le tableau suivant : Dilution 10-1 Dilution 10-2 Première boîte 12 0 Deuxième boîte 8 1
3. Ensemencement Pour une recherche à partir d’un bouillon d’enrichissement (par exemple bouillon de Chapman), on réalise un isolement classique. Pour une numération de Staphylococcus aureus, on étale en surface du milieu 0,1 mL du produit pur ou dilué à l’aide d’une pipette râteau stérile. 4. Lecture On dénombre les colonies de Staphylococcus aureus, ne pas oublier de ramener ce nombre à 1 mL. La présence de tellurite inhibe la plupart des bactéries à Gram négatif. Staphylococcus aureus donnent des colonies brillantes de 0,5 à 2 mm de diamètre : • noires (couleur due à la réduction du tellurite en tellure) tellurite + • éventuellement entourées d’un liseré blanc opaque (dû à la précipitation des acides gras issus de l’action de la lécithinase sur la lécithine du jaune d’œuf) : lécithinase + • entourées d’un halo clair (dû à la protéolyse des protéines du jaune d’œuf) : protéinase + 5. Résultats du dénombrement
5.1. Absence de colonies suspectes
a) Rappeler l’aspect des colonies suspectes d’être S. aureus sur Baird-Parker. b) Indiquer la dilution à partir de laquelle va être poursuivie la recherche. c) Calculer le nombre de colonies suspectes à identifier pour chaque boîte. L’identification est réalisée grâce à la technique d’agglutination sur la lame. d) Donner le nom des molécules mises en évidence à la surface des Staphylococcus aureus. 3 colonies sur la première boîte et 4 colonies sur la deuxième boîte se révèlent être dues à des S. aureus. e) Calculer la fraction de colonies dues à S. aureus par rapport aux colonies testées. f) En déduire le nombre statistique de colonies dues à S. aureus. g) Déterminer le nombre de S. aureus présents dans un gramme de steak haché. h) Conclure. (Critère : 102 Staphylococcus aureus par gramme de viande hachée)
C. LARCHER
Rendre : moins de un Staphylococcus aureus dans 0,1 mL du produit pur ou de la dilution testée.
C. LARCHER
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